阻濕態(tài)微生物穿透儀試驗操作方法

阻濕態(tài)微生物穿透儀

濕態(tài)阻菌測試儀又稱(chēng)為“ 阻濕態(tài)微生物穿透性測試儀”，RULLA 2濕態(tài)阻菌測試儀系標準ISO 22610 對阻濕態(tài)微生物穿透試驗的儀器，也是中國國家食品藥品監督管理局標準YY/T 0506.6阻濕態(tài)微生物穿透試驗方法實(shí)驗儀器。

工作原理：

用鋼環(huán)將三層材料（試驗材料在下，菌片居中，高密度聚乙烯膜在上面）卡在一起，將此環(huán)套件置于轉盤(pán)上的瓊脂培養皿上，試驗指以能在整個(gè)培養皿表面上移動(dòng)的方式使材料受到壓力和摩擦的綜合作用，以此模擬在實(shí)際應用過(guò)程中屏障材料可能發(fā)生的受力情況和濕態(tài)條件下的微生物穿透。菌片上的微生物穿透試驗材料后會(huì )遷移到瓊脂培養基表面，通過(guò)對瓊脂培養皿的培養和菌落計數，可對試驗材料的穿透性能進(jìn)行定量評價(jià)。

基本結構：

該儀器有一個(gè)電驅動(dòng)、電子計時(shí)器控制、轉速為60rpm的轉盤(pán)，轉盤(pán)上可安裝一個(gè)14cm直徑的瓊脂培養皿。帶有試驗指的平衡桿被一個(gè)轉速為5.60rpm的偏心軸所引導，可使重力為3±0.02N的試驗指從轉盤(pán)的中心向周邊作側向的往復運動(dòng)。在一個(gè)試驗周期內，兩個(gè)運動(dòng)的疊加，能使試驗指的作用軌跡均勻布滿(mǎn)整個(gè)圓盤(pán)表面?？傊亓繛?00±1g的內外鋼環(huán)在試驗中用以?shī)A持供試材料并對材料施加標準的繃緊力。儀器還附帶一個(gè)直徑9cm、高4cm的圓柱體，用于在三層材料的固定過(guò)程中提供平整的表面和統一的繃緊度。

阻濕態(tài)微生物穿透儀

試驗方法：

1 菌片制備

金黃色葡萄球菌ATCC 29213在胰酶大豆瓊脂上36℃±1℃下培養18-24h，將2-3個(gè)菌落接種至3ml胰酶大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對終菌懸液進(jìn)行計數。

打開(kāi)無(wú)菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤(pán)子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤(pán)子上。用培養皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個(gè)相應的區域，在該區域涂布1.0ml金黃色葡萄球菌懸浮液，然后將菌片到56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

菌片制備好后當日使用。

2 狀態(tài)調節

如需要，按照GB6529對試件進(jìn)行狀態(tài)調節，也可在標準正常室溫條件下進(jìn)行狀態(tài)天界和試驗。狀態(tài)調節的方法應記錄在試驗報告中。

3 試驗設定

調節控制桿上配重，使試驗指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

將一個(gè)瓊脂培養皿放在轉盤(pán)上。

4 材料應用

用下列計數：采用一個(gè)由內、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對材料施加標準的繃緊力。將圓柱放在內環(huán)中央，再將試件覆蓋在圓柱體和內環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個(gè)環(huán)之間。

5 試驗

將上述環(huán)組件輕輕搭放在一個(gè)去下蓋子的瓊脂培養皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉盤(pán)的外面，將試驗指置于皿口內測的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗指按上述規定施加3N壓力，是儀器運行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉盤(pán)上取下一個(gè)培養皿并放上皿蓋。馬上將第二個(gè)培養皿和環(huán)套件放在旋轉盤(pán)上。

對后面的四個(gè)培養皿用同一個(gè)環(huán)套組件執行上述步驟。

五個(gè)培養皿完成試驗后，取下菌片并棄去，將試件反轉，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個(gè)培養皿上操作15min,即完成一個(gè)平行試驗組。

其余4片試件同樣按上述方法各運行六個(gè)培養皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺上干燥，將各瓊脂培養皿加蓋置于36℃±1℃培養48h。

計數每只培養皿中金黃色葡萄球菌菌落數，培養皿中心15min半徑區域內的菌落數不計。

如果右一個(gè)皿或多個(gè)皿的計數大于750CFU（不包括上述的培養皿中心15min半徑區域內的菌落數），可重新驚醒試驗。如果重新試驗仍有一個(gè)或多個(gè)皿計數大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗。